In situハイブリダイゼーション法のソースを表示

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<font size="+1">[http://researchmap.jp/ohuchihideyo 大内 淑代]</font><[[br]]>
''岡山大学 大学院医歯薬学総合研究科細胞組織学分野''<br>
DOI：<selfdoi />　原稿受付日：2012年7月12日　原稿完成日：2013年3月25日<br>
担当編集委員：[http://researchmap.jp/noriko1128 大隅 典子]（東北大学 大学院医学系研究科 附属創生応用医学研究センター 脳神経科学コアセンター 発生発達神経科学分野）<br>
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[[Image:In situハイブリダイゼーション法1A.png|thumb|300px|'''図1A．ISHの実験例'''<br>組織切片ISH（トリ胚網膜、opsin 5、青い点状のシグナルがmRNA発現細胞、右はセンスプローブによる陰性コントロール）<br>発色基質：NBT, BCIP]]

[[Image:In situハイブリダイゼーション法1B.png|thumb|300px|'''図1B．ISHの実験例'''<br>ホールマウントISH (WISH)<br>
マウス胚WISHとWISH後の切片化（Wnt1、青線で切片化、シグナルは矢印[脊索]、凍結切片、未封入）]]

[[Image:In situハイブリダイゼーション法1C.png|thumb|300px|'''図1C．ISHの実験例'''<br>組織切片蛍光ISH＋抗体染色<br>トリ胚網膜、opsin 5 mRNA （緑）、Islet1タンパク質（マゼンダCy3、上）・GAD65/67タンパク質（マゼンタCy3、下）、核(DAPI)[青]）<br>ISHはFluorescein-tyramide法]]

[[Image:In situハイブリダイゼーション法1D.png|thumb|300px|'''図1D．ISHの実験例'''<br>マイクロRNAのWISH（マウス胚、miR-1）<br>発色基質: NBT, BCIP]]

[[Image:In situハイブリダイゼーション法2.png|thumb|300px|'''図2．組織切片を用いた''in situ''ハイブリダイゼーション法の工程''']]

英：''in situ'' hybridization　独：''In situ''-Hybridisierung　仏：hybridation in situ

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　''In situ''とは”原位置で”という意味で、''in situ''ハイブリダイゼーション(''in situ'' hybridization: ISH)とは原位置でのハイブリダイゼーション（後述）ということである。ISH法には、[[wj:染色体|染色体]]ISHと組織切片ISH、ホールマウントISH (whole-mount ISH: WISH) がある<ref>'''野地澄晴編'''<br>免疫染色&''in situ''ハイブリダイゼーション<br>''羊土社''、東京、2006</ref><ref>'''D.G. Wilkinson'''<br>In Situ Hybridization, A Practical Approach, 2nd Edition<br>''Oxford University Press'', Oxford, 1999</ref>。染色体ISH法は、染色体における目的遺伝子の[[wj:遺伝子座|遺伝子座]]を明らかにし、染色体異常を検出することができる。組織ISH法は、組織切片を用いて遺伝子発現の第一段階であるmRNAの局在を細胞レベルで明らかにする。[[wj:病理|病理]]組織から[[wj:ウイルス|ウイルス]][[wj:ゲノム|ゲノム]]を検出し、ウイルス感染の診断に用いられることもある。また、胚や器官の一部などを丸ごと用いるISH法を、ホールマウントISH（WISH）という。実験例を図1に示す。遺伝子発現部位の三次元的な情報を得た後で、細胞レベルで遺伝子発現部位を同定しなければならない場合は、WISH後の胚などの組織切片を作製する。図2に、組織切片を用いた''in situ''ハイブリダイゼーション法の工程を模式的に示す。ISHは、細胞内mRNAの局在を明らかにする実験であるので、分解されやすいRNAをいかに分解させずに実験を行うかが重要である。
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