「Cre/loxPシステム」の版間の差分

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=== Cre発現依存的遺伝子欠損(コンディショナルノックアウト)  ===
=== Cre発現依存的遺伝子欠損(コンディショナルノックアウト)  ===


 特定の遺伝子の機能を[[マウス]]など動物個体で解析することを目的として、その遺伝子を欠損させた遺伝子[[ノックアウト動物]]が用いられる。しかし対象とする遺伝子の欠損により致死となるため目的の解析が出来ないことがある。そのような場合はある特定の組織だけで遺伝子を欠損することでこの問題を回避できる。 まず、欠損させたい遺伝子の両端にloxP配列をジーンターゲティング法により挿入した遺伝子改変動物を作製し、さらに組織特異的プロモーターの制御下でCreを発現するトランスジェニック動物を交配する。得られた動物個体内では組織特異的プロモーターが働く部位のみ遺伝子が欠損する。また、Creを発現するためのプロモーターを選択することにより、組織特異的な遺伝子ノックアウトだけではなく時期特異的な遺伝子ノックアウトも可能である(図4)。
 特定の遺伝子の機能を[[マウス]]など動物個体で解析することを目的として、その遺伝子を欠損させた遺伝子[[ノックアウト動物]]が用いられる。しかし対象とする遺伝子の欠損により致死となるため目的の解析が出来ないことがある。そのような場合はある特定の組織だけで遺伝子を欠損することでこの問題を回避できる。 まず、欠損させたい遺伝子の両端にloxP配列を[[ジーンターゲティング法]]により挿入した遺伝子改変動物を作製し、さらに組織特異的[[プロモーター]]の制御下でCreを発現する[[トランスジェニック動物]]を交配する。得られた動物個体内では組織特異的プロモーターが働く部位のみ遺伝子が欠損する。また、Creを発現するためのプロモーターを選択することにより、組織特異的な遺伝子ノックアウトだけではなく時期特異的な遺伝子ノックアウトも可能である(図4)。


[[Image:CreloxP図4.jpg|thumb|right|300px|'''図4.Cre発現依存的遺伝子欠損''']]  
[[Image:CreloxP図4.jpg|thumb|right|300px|'''図4.Cre発現依存的遺伝子欠損''']]  
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=== Cre発現依存的遺伝子発現  ===
=== Cre発現依存的遺伝子発現  ===


 ある遺伝子を細胞あるいは動物個体の組織で高発現させるためには組織特異的プロモーターの下流に目的の遺伝子をつなげた外来遺伝子を構築し導入する方法が用いられる。 しかし、そのプロモーターによる発現量が低かった場合には以下の方法を用いることでプロモーターの組織特性を保ちながら目的遺伝子の高発現が期待できる。 まず、組織特異的プロモーターの下流にCre遺伝子をつけた外来遺伝子およびMCVプロモーターなどの高発現が期待できるプロモーター下流に2つのloxP配列に挟まれた[[wikipedia:ja:ポリアデニル化|polyA付加シグナル]]などの転写停止配列、さらにその下流に目的の遺伝子をつなげた外来遺伝子をそれぞれ構築する。これらの外来遺伝子を同時に導入すると、組織特異的プロモーターが働く部位ではloxP配列間の転写停止配列が欠損し、その下流に位置する目的遺伝子が高発現する。一方、組織特異的プロモーターが働かない部位では転写停止配列が存在するため目的の遺伝子は発現しない(図5)。
 ある遺伝子を細胞あるいは動物個体の組織で高発現させるためには組織特異的プロモーターの下流に目的の遺伝子をつなげた外来遺伝子を構築し導入する方法が用いられる。 しかし、そのプロモーターによる発現量が低かった場合には以下の方法を用いることでプロモーターの組織特性を保ちながら目的遺伝子の高発現が期待できる。 まず、組織特異的プロモーターの下流にCre遺伝子をつけた外来遺伝子および[[サイトメガロウイルス]](CMV)プロモーターなどの高発現が期待できるプロモーター下流に2つのloxP配列に挟まれた[[wikipedia:ja:ポリアデニル化|polyA付加シグナル]]などの転写停止配列、さらにその下流に目的の遺伝子をつなげた外来遺伝子をそれぞれ構築する。これらの外来遺伝子を同時に導入すると、組織特異的プロモーターが働く部位ではloxP配列間の転写停止配列が欠損し、その下流に位置する目的遺伝子が高発現する。一方、組織特異的プロモーターが働かない部位では[[wikipediaLja:転写停止配列|転写停止配列]]が存在するため目的の遺伝子は発現しない(図5)。


[[Image:CreloxP図5.jpg|thumb|right|300px|'''図5.Cre発現依存的遺伝子発現''']]
[[Image:CreloxP図5.jpg|thumb|right|300px|'''図5.Cre発現依存的遺伝子発現''']]