「FM1-43」の版間の差分

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== 応用例  ==
== 応用例  ==
==== シナプス前終末における小胞プールの大きさと開口放出確率の測定  ====
=== シナプス前終末における小胞プールの大きさと開口放出確率の測定  ===


[[Image:Takahashinoriko fig 3.jpg|thumb|250px|'''図3. 開口放出に伴う FM 蛍光の変化'''<br>膜融合時、細胞外色素の有無により蛍光変化の様式が異なる。]]  
[[Image:Takahashinoriko fig 3.jpg|thumb|250px|'''図3. 開口放出に伴う FM 蛍光の変化'''<br>膜融合時、細胞外色素の有無により蛍光変化の様式が異なる。]]  


 シナプスを刺激した時にミリ秒で起きる伝達物質放出は、[[活性帯]] ([[active zone]])にドックした小胞が開口放出すると仮想されている。この仮想的な小胞群を[[即時性放出プール]] ([[readily releasable pool]], [[RRP]])という。[[シナプス小胞]]は開口放出後 30-60秒で細胞内部に[[エンドサイトーシス]]で取り込まれる(図 3左)。更に、シナプス終末内でシナプス小胞に再生されて即時性放出プールに再び至る。これを[[リサイクリング]]と呼び、これに関係する小胞の全体を[[リサイクリングプール]] ([[recycling pool]])、又は[[放出可能プール]] (total recycling pool, TRP)という。
 シナプスを刺激した時にミリ秒で起きる伝達物質放出は、[[活性帯]] ([[active zone]])にドックした小胞が開口放出すると仮想されている。この仮想的な小胞群を[[即時性放出プール]] ([[readily releasable pool]], [[RRP]])という。[[シナプス小胞]]は開口放出後 30-60秒で細胞内部に[[エンドサイトーシス]]で取り込まれる(図 3左)。更に、シナプス終末内でシナプス小胞に再生されて即時性放出プールに再び至る。これを[[リサイクリング]]と呼び、これに関係する小胞の全体を[[リサイクリングプール]] ([[recycling pool]])、又は[[放出可能プール]] ([[total recycling pool]], [[TRP]])という。


 細胞外を FM1-43 で還流中に、長い放出刺激(例 20 Hz、900 発)を与え、[[開口放出]]([[エクソサイトーシス]])した小胞の膜を染め出し、その後色素を含まない溶液で細胞外を還流し、外膜に結合した色素を wash out すると、TRPの全体が染まる。一方、ちょうど RRPにある小胞を枯渇させる程度の短い放出刺激(例 20 Hz、30 発)を与えて wash outをすると RRPが選択的に染まる。この様な解析から、RRPは TRPの 10-30%程度と推定されており<ref><pubmed> 15044806 </pubmed></ref>、TRPが40個程度の小さなシナプスでは RRPの小胞数は 4-12個となる。
 細胞外を FM1-43 で還流中に、長い放出刺激(例 20 Hz、900 発)を与え、[[開口放出]]([[エクソサイトーシス]])した小胞の膜を染め出し、その後色素を含まない溶液で細胞外を還流し、外膜に結合した色素を wash out すると、TRPの全体が染まる。一方、ちょうど RRPにある小胞を枯渇させる程度の短い放出刺激(例 20 Hz、30 発)を与えて wash outをすると RRPが選択的に染まる。この様な解析から、RRPは TRPの 10-30%程度と推定されており<ref><pubmed> 15044806 </pubmed></ref>、TRPが40個程度の小さなシナプスでは RRPの小胞数は 4-12個となる。
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 シナプス小胞から大型有芯小胞に至るまで、小胞の直径計測に有効である <ref><pubmed> 16150799 </pubmed></ref>。  
 シナプス小胞から大型有芯小胞に至るまで、小胞の直径計測に有効である <ref><pubmed> 16150799 </pubmed></ref>。  


 水溶性色素(赤色[[wikipedia:ja:スルホローダミンB|スルホローダミンB]], SRB)と FM1-43を細胞外液に同時に与え、開口放出を誘発すると、水溶性色素は小胞内部に進入し、FM1-43は細胞外膜から小胞内膜へ拡散するため、開口放出した小胞が両色素で描出される。この際 [[2光子レーザー走査顕微鏡]]で画像を取得し、双方の色素の増加分の比を求めると小胞直径が計算される(直径=6 ΔSRB/ΔFM1-43)。本法は色素濃度やレンズ特性([[wikipedia:ja:点拡がり関数|点拡がり関数]])によらず、シナプス小胞のような光学[[wikipedia:ja:解像度|解像度]]以下の器官の計測にも応用可能である。  
 水溶性色素(赤色[[wikipedia:ja:スルホローダミンB|スルホローダミンB]], SRB)と FM1-43を細胞外液に同時に与え、開口放出を誘発すると、水溶性色素は小胞内部に進入し、FM1-43は細胞外膜から小胞内膜へ拡散するため、開口放出した小胞が両色素で描出される。この際 [[2光子レーザー走査顕微鏡]]で画像を取得し、双方の色素の増加分の比を求めると小胞直径が計算される(直径=6 ΔSRB/ΔFM1-43)。本法は色素濃度やレンズ特性([[wikipedia:ja:点拡がり関数|点拡がり関数]])によらず、シナプス小胞のような光学[[wikipedia:ja:解像度|解像度]]以下の器官の計測にも応用可能である。


== 関連項目  ==
== 関連項目  ==