「ディファレンシャルディスプレイ」の版間の差分

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== 方法と手順  ==
== 方法と手順  ==


 以下、通常のmRNA試料を対象としたディファレンシャルディスプレイ法について説明する (図2)<ref><pubmed> 11168596</pubmed><ref>。[[Image:DDRT-fig3.jpg|thumb|right|300px|図2 ディファレンシャルディスプレイ法の手順]]  
 以下、通常のmRNA試料を対象としたディファレンシャルディスプレイ法について説明する (図2)<ref><pubmed> 11168596</pubmed></ref>。[[Image:DDRT-fig3.jpg|thumb|right|300px|図2 ディファレンシャルディスプレイ法の手順]]  


 細胞中で発現したmRNAすべてを[[wikipedia:ja:逆転写|逆転写]]しcDNAを得た後、これを鋳型にして複数の混合プライマーを用いたPCRを行う。ここで、特異性を持たせずできるだけ多くの種類のcDNA断片を増幅するよう設定した複数のプライマーを用いることにより、非常に多数のバンドが得られる。1つの細胞で発現し得る約15,000種類の遺伝子すべての発現を網羅して探索するために、3種類のアンカープライマーと20種類の混成プライマー(10 mer)を用いてPCRを行う。得られたバンドの強弱を遺伝子発現の強度の指標とし、特定の物質添加の有無などさまざまな操作・環境の違いによりその細胞のどの遺伝子が変化しているかを見出す。  
 細胞中で発現したmRNAすべてを[[wikipedia:ja:逆転写|逆転写]]しcDNAを得た後、これを鋳型にして複数の混合プライマーを用いたPCRを行う。ここで、特異性を持たせずできるだけ多くの種類のcDNA断片を増幅するよう設定した複数のプライマーを用いることにより、非常に多数のバンドが得られる。1つの細胞で発現し得る約15,000種類の遺伝子すべての発現を網羅して探索するために、3種類のアンカープライマーと20種類の混成プライマー(10 mer)を用いてPCRを行う。得られたバンドの強弱を遺伝子発現の強度の指標とし、特定の物質添加の有無などさまざまな操作・環境の違いによりその細胞のどの遺伝子が変化しているかを見出す。