「リアノジン受容体」の版間の差分

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　リアノジン受容体は細胞内[[カルシウム]]貯蔵部位である小胞体膜上に存在するカルシウムチャネルであり、その名は、植物[[wikipedia:ja:アルカロイド|アルカロイド]]である[[wikipedia:ja:リアノジン|リアノジン]]が結合することに由来する。小胞体からのカルシウム放出を担うことから、同じく小胞体膜上に存在するカルシウムチャネルである[[イノシトール1,4,5-三リン酸受容体]](inositol 1,4,5-trisphosphate receptor; IP₃R)とともに、カルシウム放出チャネルとも呼ばれ、細胞内カルシウム濃度調節に関与する(図1)。RyRには三種類のサブタイプが存在し、それぞれ異なった分布を示すが、脳においては三種類全ての発現が見られる。また三種類のサブタイプ全てに対して遺伝子欠損マウスが作成されているが、1型RyR欠損マウスは出生致死、2型RyR欠損マウスは胎生致死を示す。3型RyR欠損マウスのみ生後も生存・成熟するため解析が可能であり、脳機能への関与についての報告が存在する。他にも、主に薬理学的なアプローチにより、シナプス可塑性・神経細胞興奮性などへのRyRの関与が示唆されている。

 

ファイル:RyR signal.jpg|'''図1．リアノジン受容体を介するシグナル系'''<br>脳の神経細胞におけるリアノジン受容体(RyRs)を介するシグナル伝達。海馬の錐体細胞ではNMDA型グルタミン酸受容体(NMDAR)、小脳のプルキンエ細胞では電位依存症カルシウムチャネル(VDCC)を介する細胞外からのカルシウム流入による細胞内カルシウム濃度上昇により、Ca²⁺-induced Ca²⁺ releaseが起こる。一方、小脳プルキンエ細胞では一酸化窒素(NO)による1型RyR(RyR1)のS-ニトロシル化によりNO-induced Ca²⁺releaseも起こる。ER:endoplasmic reticulum; IP3R:inositol 1,4,5 tris phosphate receptor; SERCA: sarco/endoplasmic reticulum Ca²⁺ ATPase.

　カルシウムイオン(Ca²⁺)は普遍的かつ基本的な[[シグナル伝達]]を担う[[セカンドメッセンジャー]]であり、極めて多くの生命現象に関与する。細胞内におけるカルシウムシグナル形成は、[[細胞膜]]に存在するカルシウムチャネルを介して細胞外から細胞内へのカルシウムの流入によるものと、細胞内カルシウムストア（小胞体）からカルシウム放出チャネルを介して細胞質へ放出される2通りの経路による。[[カルシウム誘発性カルシウム放出|カルシウム誘発性カルシウム放出]](Ca²⁺-induced Ca²⁺ release; CICR)は、[[細胞質]]側のカルシウム濃度上昇が細胞内ストアから細胞質へのカルシウム放出を促進する現象であり、[[wikipedia:ja:骨格筋|骨格筋]]で最初に見出された<ref><pubmed>5456208</pubmed></ref>。その後、同様の現象が多くの[[wikipedia:ja:興奮性細胞|興奮性細胞]]において見られたことから、CICRは細胞内カルシウムシグナルを増幅するための普遍的な機構であると考えられるようになり、CICRの分子実体であるCICRチャネルの薬理学的性質が調べられた。その結果、植物アルカロイドであるリアノジンがCICRチャネルに特異的に結合し、低濃度ではチャネルを開口状態に固定する薬物であることが示された。  

　引き続き、標識リアノジンを用いた結合活性を指標に、骨格筋よりCICRチャネル、即ちリアノジン受容体(RyR)が精製された<ref><pubmed>2448641</pubmed></ref>。その後の遺伝子クローニングにより、少なくとも[[wikipedia:ja:硬骨魚類|硬骨魚類]]以上の[[wikipedia:ja:脊椎動物|脊椎動物]]では、別々の遺伝子にコードされる3種類のRyRサブタイプが存在することが判明し、それぞれ、1型/骨格筋型(RyR1)、2型/心筋型(RyR2)、3型/脳型(RyR3)と呼ばれる<ref><pubmed>9137551</pubmed></ref><ref><pubmed>12777839</pubmed></ref>。各サブタイプは互いに65%程度のアミノ酸配列相同性を示すが、異なる組織分布・脳内分布を示す<ref><pubmed>1330694</pubmed></ref><ref name=ref6><pubmed> 7876312 </pubmed></ref>。一方、[[線虫]]<ref><pubmed>9135117</pubmed></ref>、[[ショウジョウバエ]]<ref><pubmed>8276118</pubmed></ref>においては、どのタイプにも属さないRyR相同物が同定されており、[[wikipedia:ja:無脊椎動物|無脊椎動物]]においては単一遺伝子にコードされていたものが、脊椎動物において組織分布や機能的役割が異なる3種のサブタイプに分子進化したと推測されている。  

　RyRは約5,000アミノ酸残基より構成される分子量約550kDaの巨大タンパク質であり、そのホモ4量体により機能的なカルシウム放出チャネルが形成される。RyR分子内では、アミノ末端側約4,500アミノ酸が細胞質側に大きく張り出した、いわゆるfoot構造に対応する領域を形成し、4本の推定膜貫通セグメントを含む残りのカルボキシル末端がチャネル領域を形成する(図2)。同じくカルシウム放出チャネルであるIP₃受容体とRyRは、カルボキシル末端の膜貫通セグメントを含む約200アミノ酸において特に高い配列相同性を示し、この部分がカルシウム放出チャネルとして共通するイオン透過性に関連した機能に関与していると推測される。実際に、RyR1のカルボキシル末側の約1,000アミノ酸残基よりなる領域のみでリアノジン感受性を有する基本的なカルシウムチャネルが形成されることが、脂質二重膜を用いた再構築実験により示されている。この再構築系においてC末端領域が形成するチャネルは、[[wikipedia:ja:陽イオン|陽イオン]]選択性、細胞質側カルシウムによる活性化機構、リアノジン感受性を保持する一方で、全長RyR1チャネルに見られる高濃度のカルシウムによる不活性化機構を欠く。また、RyRサブタイプ間での一次構造の比較により、D1、D2、D3と呼ばれる相同性が顕著に低い領域が見られる。RyR1のcDNA発現実験系を用いた研究により、CICRによるチャネル活性化のカルシウム結合部位はD1領域、チャネルを不活性化する高濃度カルシウムの結合部位はD3領域に存在するとされている<ref name="ref9"><pubmed>17506640</pubmed></ref><ref name="ref10"><pubmed>20961976</pubmed></ref>(図3)。  

　[http://mouse.brain-map.org/experiment/show/69288273 RyR1]は骨格筋において極めて高レベルの発現が見られる。また、[[小脳]][[プルキンエ細胞]]を始めとする脳内各部位でも発現が見られる他、[[wikipedia:ja:食道|食道]]、[[wikipedia:ja:食道|精巣]]でも他の部位に比較して高レベルの発現が見られる。小脳プルキンエ細胞においては、高レベルの発現が見られるとともに3つのサブタイプの中でも最も発現量が多い。[[海馬]][[歯状回]]でも高レベルの発現が見られるが、歯状回においてはRyR2の発現量が最も多い。さらに、[[線条体]]、[[嗅球]][[僧帽細胞]]などでも、他の領域と比較して高レベルの発現が見られる。  

　[http://mouse.brain-map.org/experiment/show/69288279 RyR2]は[[wikipedia:ja:心筋|心筋]]細胞で極めて高レベルの発現が見られる他、[[wikipedia:ja:平滑筋|平滑筋]]・[[wikipedia:ja:肺|肺]]・脳でも高レベルの発現が見られる。脳内の様々な部位において広く発現が見られるが、特に海馬(歯状回・[[CA領域]])、[[大脳皮質]]、小脳[[顆粒細胞層]]、嗅球顆粒細胞層などで高レベルの発現が見られる。

　[http://mouse.brain-map.org/experiment/show/71325426 RyR3]は脳cDNAライブラリーからのクローニングにより存在が明らかになったが、脳以外にも平滑筋、骨格筋、一部の[[wikipedia:ja:上皮細胞|上皮細胞]]や[[wikipedia:ja:リンパ球|リンパ球]]培養細胞などにおいて低レベルの発現が見られる。海馬CA領域で高レベルの発現が見られる。海馬歯状回、線条体などでも比較的発現レベルが高い。

　細胞質に存在するカルシウムイオンは、濃度依存的に全てのRyRサブタイプに共通して作用する調節因子である。サブμMからμMの範囲における細胞質側カルシウムはRyRを開口させ細胞内カルシウムストアである小胞体からカルシウムを遊離させる、いわゆるカルシウム依存性(誘発性)カルシウム放出(CICR)現象をお引き起こす。一方、より高濃度のmMレベルのカルシウムはチャネル活性を抑制する。また、小胞体内腔側のカルシウムによる活性化も見られる。心筋では、脱分極による[[L型カルシウムチャネル]]([[Cv1.2]])の開口により細胞外からカルシウムが流入し、RyR2を開口させカルシウム放出を引き起こし、細胞内カルシウムシグナルを増幅するが、中枢神経系においても、小脳プルキンエ細胞では電位依存性の[[P/Q型カルシウムチャネル]]、海馬錐体細胞では[[NMDA型グルタミン酸受容体]]を介するカルシウム流入によりRyRが活性化されカルシウム放出が誘導されることが示唆されている。  

　骨格筋においてはL型カルシウムチャネル([[Cv1.1]])とRyR1が機械的にカップリングし、興奮収縮連関において細胞膜が脱分極するとL型カルシウムチャネルのコンフォーメーションが変化し、タンパク質-タンパク質相互作用を介してRyR1が活性化されると考えられている。一方、中枢神経系における機械的なカップリングに関しては、多くの点が不明である。  

　RyRの内在性の因子による活性調節として、[[カルモジュリン]]による濃度依存的な活性化と不活性化、[[wikipedia:ja:ATP|ATP]]を含む[[wikipedia:ja:アデニン|アデニン]]ヌクレオチド、[[プロテインキナーゼA]]などの[[リン酸]]化酵素、[[cADPリボース]]などによる活性化、および[[wikipedia:ja:免疫抑制薬|免疫抑制薬]]である[[wikipedia:ja:FK506|FK506]]の結合タンパク質[[FKBP12]]によるRyR2チャネルの静止および開口状態を安定化する作用が示唆されている。さらに[[一酸化窒素]](NO)による[[S-ニトロシル化]]がRyR1の[[開口確率]]を上昇させることが''in vitro''の実験系により示されていたが、つい最近、小脳プルキンエ細胞において内因性NOの作用によりRyR1を介したカルシウム放出が誘導されることが示された(一酸化窒素依存的カルシウム放出の項 参照)。  

　リアノジンは低濃度では開状態のRyRに結合し、サブコンダクタンス状態に開口固定しカルシウム遊離を引き起こすが、高濃度ではRyR活性を抑制する。また、カフェインによるRyRの活性化、[[ダントロレン]] dantrolene による抑制(主にRyR1、RyR3に対する作用)が知られている。  

　RyRの機能的役割解明を困難なものにしている主要な原因として、[[遺伝子欠損動物]]の致死性が挙げられる。上述の通り、[[wikipedia:ja:哺乳類|哺乳類]]の脳の多くの領域では、複数のRyRサブタイプが重複して発現しているが、RyR1欠損マウス、RyR2欠損マウスはそれぞれ単独で、出生致死、胎生致死を示す。したがって、複数のRyRサブタイプ遺伝子の二重もしくは三重欠損マウスが成熟しないことは自明であり、全身レベルでの遺伝子欠損マウスを用いたアプローチによっては、脳におけるRyRの機能は困難である。しかし、RyR3欠損マウスは生後も生存・成熟するため、その解析結果の報告が存在する<ref name="ref11"><pubmed>20214899</pubmed></ref>。

:　[[wikipedia:ja:横隔膜|横隔膜]]の骨格筋細胞の機能不全に起因すると考えられる[[wikipedia:ja:呼吸不全|呼吸不全]]により、生後全く動くことなく出生致死の表現型を示す<ref><pubmed>7515481</pubmed></ref>。  

:　RyR3欠損マウスはほぼ正常に発育し重篤な異常は認められないが、これまでに自発的運動活性の亢進、社会的接触行動の減少、[[恐怖条件付け反応]]の低下が報告され、その神経系での重要性が示唆されている。また、海馬CA1領域において、穏やかな刺激で誘導された[[LTP]]の維持が阻害されるとの報告がある一方で、同じく海馬領域におけるLTPの誘導閾値が低下するとの報告もある。ただし、RyR3欠損マウスの軽度な中枢機能異常に関しては、重複して発現する他のサブタイプによる補完作用を考慮する必要がある<ref><pubmed>10595520</pubmed></ref><ref><pubmed>11358488</pubmed></ref>。

　海馬[[CA3]]領域の[[苔状線維]][[軸索]]([[シナプス前終末]]よりも[[軸索起始部]]寄りの部分)においては、電位依存性カルシウムチャネルによるカルシウムシグナルがRyR1によるCICR機構を介して増幅されることにより、高頻度刺激に神経伝達物資の放出が増強されることが示されており、シナプス前終末における可塑性へのRyRの関与も示唆されている<ref><pubmed>18687898</pubmed></ref>。

　骨格筋においてRyR1は上述のように脱分極によるCav1.1の活性化をトリガーとして活性化するが、特殊条件下ではCICR機構によるチャネル開口も起こし得る。MHは[[wikipedia:ja:ハロタン|ハロタン]]などの[[wikipedia:ja:吸入全身麻酔|吸入全身麻酔]]により発生する全身性の筋硬縮と発熱を特徴とする、RyR1によるCICR機構が著しく亢進した病態である。MHの原因となる変異型RyR1は、通常よりも低い細胞質カルシウム濃度においてCICR機構によるチャネルの活性化が生じる。したがって、RyRへの刺激作用を有する吸入麻酔薬に敏感に反応することで小胞体カルシウム放出が誘導され、その結果、全身の筋組織が硬縮し熱を産生する。MHのアミノ酸点変異は、RyR1のCICRチャネルとしてのカルシウム感受性をより高める変異であり、世界各地で発症した悪性高熱症についての様々な点変異が報告されている<ref name="ref9" /><ref name="ref10" />。  

　本症候群は精神的または身体的ストレス時に[[交感神経]]活動が亢進することにより誘発される多形性[[wikipedia:ja:心室頻拍|心室頻拍]]の反復出現を特徴とする疾患である。このCPVP家系には急死例が多く、[[wikipedia:ja:常染色体性優性遺伝|常染色体性優性遺伝]]形式をとり、その原因遺伝子として心臓RyR2の変異が関与する。交感神経によるβ受容体刺激の心臓収縮の増強作用の機序の1つとして、心筋細胞内でcAMP依存性リン酸化酵素によるRyR2のリン酸化・活性化を介して小胞体カルシウム放出を亢進することが知られている。悪性高熱症と同様に、CPVP家系で見出される遺伝子変異はRyR2をより活性型に誘導する変異であると考えられ、[[β受容体]]刺激時に過剰にRyR2が活性化することが致死的な頻拍を誘導することが示唆されている。欧米各国での発症例についてRyR2上での様々な点変異が報告されている<ref name="ref9" /><ref name="ref10" />。  

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