「初代培養」の版間の差分

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[[Image:Hippocampal primary neuron.jpg|frame|right|280x205px|'''図1 海馬培養ニューロン'''<br>培養開始3日後。スケールバー、50 µm]]  
[[Image:Hippocampal primary neuron.jpg|frame|right|280x205px|'''図1 海馬培養ニューロン'''<br>培養開始3日後。スケールバー、50 µm]]  


 [[脊髄]][[後根神経節]]や、[[皮質]]および[[海馬]]由来のニューロンの培養が一般的に用いられている。[[wikipedia:JA:マウス|マウス]]、[[wikipedia:JA:ラット|ラット]]のみならず[[wikipedia:JA:ニワトリ|ニワトリ]]、[[wikipedia:JA:カエル|カエル]]など多様な生物のニューロンの初代培養系が確立されている。主に胎生期の動物の[[脳]]や脊髄を摘出し、顕微鏡下でおおまかに目的の部位を切り出す。これを細胞解離酵素(トリプシンなど)で処理し、細胞を解離する。この細胞をあらかじめ[[wikipedia:JA:ラミニン|ラミニン]]や[[wikipedia:Polylysine|ポリ-L-リシン]]などでコートした培養皿に播く。培養後一日程で、神経突起の伸長が観察される(図1)。また、およそ7日後には[[シナプス]]の形成が認められ、軸索伸長のメカニズムや[[樹状突起]]の形成、さらには電気生理学的な性質を解析することが可能である。海馬由来のニューロンの場合5ヶ月程度培養したという報告があるが<ref><pubmed> 8475109 </pubmed></ref>、[[運動ニューロン]]などは長期間の培養が困難である。  
 [[脊髄]][[後根神経節]]や、[[皮質]]および[[海馬]]由来のニューロンの培養が一般的に用いられている。[[wikipedia:JA:マウス|マウス]]、[[wikipedia:JA:ラット|ラット]]のみならず[[wikipedia:JA:ニワトリ|ニワトリ]]、[[wikipedia:JA:カエル|カエル]]など多様な生物のニューロンの初代培養系が確立されている。主に胎生期の動物の[[脳]]や脊髄を摘出し、顕微鏡下でおおまかに目的の部位を切り出す。これを細胞解離酵素(トリプシンなど)で処理し、細胞を解離する。この細胞をあらかじめ[[wikipedia:JA:ラミニン|ラミニン]]や[[wikipedia:Polylysine|ポリ-L-リシン]]などでコートした培養皿に播く。培養後一日程で、神経突起の伸長が観察される(図1)。また、およそ7日後には[[シナプス]]の形成が認められ、軸索伸長のメカニズムや[[樹状突起]]の形成、さらには電気生理学的な性質を解析することが可能である。海馬由来のニューロンの場合5ヶ月程度培養したという報告があるが<ref name=ref1><pubmed> 8475109 </pubmed></ref>、[[運動ニューロン]]などは長期間の培養が困難である。  


== グリア細胞の初代培養  ==
== グリア細胞の初代培養  ==


 グリア系細胞の初代培養は、ニューロンの培養より後期の脳組織を材料として用いる事が多い([[wikipedia:JA:齧歯類|齧歯類]]では生後0-3日目程度)。神経組織を細胞解離酵素で処理し、[[wikipedia:JA:血清|血清]]存在下の培地で培養すると、様々なグリア細胞が増殖する。このグリア系細胞を、培養基質に対する接着性などの違いを利用して分離することによって、それぞれアストロサイト、オリゴデンドロサイト、ミクログリアの初代培養が可能である。また、細胞表面抗原に対する[[wikipedia:JA:モノクローナル抗体|モノクローナル抗体]]([[グリア系前駆細胞]]のマーカーであるA2B5抗体、オリゴデンドロサイト前駆細胞のマーカーであるO4抗体など)によって、解離した細胞をペトリディッシュ上に吸着することにより、特定の細胞種を分離するimmunopanning法もしばしば用いられる<ref><pubmed> 8475109 </pubmed></ref>。[[末梢神経]]系に存在するシュワン細胞は、主にマウスやラットの[[坐骨神経]]から単離する。  
 グリア系細胞の初代培養は、ニューロンの培養より後期の脳組織を材料として用いる事が多い([[wikipedia:JA:齧歯類|齧歯類]]では生後0-3日目程度)。神経組織を細胞解離酵素で処理し、[[wikipedia:JA:血清|血清]]存在下の培地で培養すると、様々なグリア細胞が増殖する。このグリア系細胞を、培養基質に対する接着性などの違いを利用して分離することによって、それぞれアストロサイト、オリゴデンドロサイト、ミクログリアの初代培養が可能である。また、細胞表面抗原に対する[[wikipedia:JA:モノクローナル抗体|モノクローナル抗体]]([[グリア系前駆細胞]]のマーカーであるA2B5抗体、オリゴデンドロサイト前駆細胞のマーカーであるO4抗体など)によって、解離した細胞をペトリディッシュ上に吸着することにより、特定の細胞種を分離するimmunopanning法もしばしば用いられる<ref name=ref1 />。[[末梢神経]]系に存在するシュワン細胞は、主にマウスやラットの[[坐骨神経]]から単離する。  


=== アストロサイトの初代培養  ===
=== アストロサイトの初代培養  ===