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<font size="+1">[http://researchmap.jp/h-gotoh 後藤 仁志]、[http://researchmap.jp/read0048382 小野 勝彦]、[http://researchmap.jp/nomurahana 野村 真]</font><br> | |||
''京都府立医科大学''<br> | |||
DOI：<selfdoi /> 原稿受付日：2013年3月25日 原稿完成日：2013年3月28日<br> | |||
担当編集委員：[http://researchmap.jp/noriko1128 大隅 典子]（東北大学 大学院医学系研究科 附属創生応用医学研究センター 脳神経科学コアセンター 発生発達神経科学分野）<br> | |||
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英：primary culture | 英：primary culture | ||
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生物の最も基本的な構成単位である細胞は、様々な方法によって生体外で[[wikipedia:JA:培養|培養]]することが可能である。なかでも、動物・植物の[[wikipedia:JA:組織 (生物学)|組織]]を直接用いた細胞培養のことを“初代培養”という。初代培養細胞は生体内に近い状態を維持していると考えられるため、様々な研究に用いることができる。 神経組織を構成する細胞に関しては、ニューロン（神経細胞）、グリア細胞（神経膠細胞）である[[アストロサイト]]、[[オリゴデンドロサイト]]、[[シュワン細胞]]、[[ミクログリア]]など、神経系細胞のほとんどが初代培養可能である<ref>'''Doering, LC.'''<br>Protocols for Neural Cell Culture: Fourth Edition.<br>''Springer Protocols Handbooks'':2004</ref>。一般的に、継代を経ない培養のことを初代培養と呼ぶことが多いが、[[グリア]]細胞の培養系は継代を経る場合もあり、広義な初代培養に含められる。[[グリア]]細胞の場合でも、何世代も継代が可能な株化培養細胞とは異なって継代回数が限られている場合が多い。<br> | 生物の最も基本的な構成単位である細胞は、様々な方法によって生体外で[[wikipedia:JA:培養|培養]]することが可能である。なかでも、動物・植物の[[wikipedia:JA:組織 (生物学)|組織]]を直接用いた細胞培養のことを“初代培養”という。初代培養細胞は生体内に近い状態を維持していると考えられるため、様々な研究に用いることができる。 神経組織を構成する細胞に関しては、ニューロン（神経細胞）、グリア細胞（神経膠細胞）である[[アストロサイト]]、[[オリゴデンドロサイト]]、[[シュワン細胞]]、[[ミクログリア]]など、神経系細胞のほとんどが初代培養可能である<ref>'''Doering, LC.'''<br>Protocols for Neural Cell Culture: Fourth Edition.<br>''Springer Protocols Handbooks'':2004</ref>。一般的に、継代を経ない培養のことを初代培養と呼ぶことが多いが、[[グリア]]細胞の培養系は継代を経る場合もあり、広義な初代培養に含められる。[[グリア]]細胞の場合でも、何世代も継代が可能な株化培養細胞とは異なって継代回数が限られている場合が多い。<br> | ||
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== ニューロンの初代培養の歴史 == | == ニューロンの初代培養の歴史 == | ||
19世紀中頃に、[[wikipedia:Wilhelm His, Sr.|Wilhelm His]]はニューロンの軸索がどのように形成されるのかについて、[[軸索]]は発生期に[[細胞体]]からの突起として出現するという仮説を提唱した。これは、分裂した細胞が鎖状につながることによって軸索を形成するという説とともに論議をよんだ。Hisの仮説は、後年の[[wikipedia:JA:サンティアゴ・ラモン・イ・カハール|Cajal]]らの組織学的解析によって支持されていたが、より直接的に証明する必要があった。そのため、アメリカのHarrisonらはニューロンの突起伸長を’生きたまま’観察するための方法を考案した。それは、カエル胚から採取した[[神経管]]をカエルの[[wikipedia:JA:リンパ液|リンパ液]]中で培養する方法である。この方法によりニューロンの突起伸長を経時的に観察することが可能となり、軸索は細胞体からの突起が伸長することによって形成されることを直接的に証明した<ref><pubmed> 13711840 </pubmed></ref>。このことが、いわゆる組織培養（広義の初代培養）の始めであるとされている。後年、[[wikipedia:JA:レナート・ドゥルベッコ|ダルベッコ]]らによって開発された[[wikipedia:JA:トリプシン|トリプシン]]を用いて組織を解離し、単一細胞として培養する方法、また、[[wikipedia:JA:培地|培地]]や添加剤の改良などを経て、現在の神経系初代培養技術が確立した。 | |||
== ニューロンの初代培養 == | == ニューロンの初代培養 == | ||
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=== アストロサイトの初代培養 === | === アストロサイトの初代培養 === | ||
フラスコ内でグリア混合培養を増殖させて[[wikipedia:JA:コンフルエント|コンフルエント]]にする。そのフラスコを激しく振とうすることによって、接着性の弱いミクログリアやオリゴデンドロサイト前駆細胞を除く。その後、残存した細胞をトリプシンなどで処理し、新たなプレートに播種する。全細胞におけるアストロサイトの純度は、アストロサイトマーカーである[[グリア線維性酸性タンパク質]]（GFAP）に対する抗体を用いた免疫染色で確認することができる。<br>上記の培養法と異なり、より生体内条件に近いとされるアストロサイトの培養方法が近年報告されている<ref><pubmed> 21903074 </pubmed></ref>。これは、前述のimmunopanning法によってアストロサイトを吸着し、培養する方法である。 | フラスコ内でグリア混合培養を増殖させて[[wikipedia:JA:コンフルエント|コンフルエント]]にする。そのフラスコを激しく振とうすることによって、接着性の弱いミクログリアやオリゴデンドロサイト前駆細胞を除く。その後、残存した細胞をトリプシンなどで処理し、新たなプレートに播種する。全細胞におけるアストロサイトの純度は、アストロサイトマーカーである[[グリア線維性酸性タンパク質]]（GFAP）に対する抗体を用いた免疫染色で確認することができる。<br>上記の培養法と異なり、より生体内条件に近いとされるアストロサイトの培養方法が近年報告されている<ref><pubmed> 21903074 </pubmed></ref>。これは、前述のimmunopanning法によってアストロサイトを吸着し、培養する方法である。 | ||
=== オリゴデンドロサイトの初代培養 === | === オリゴデンドロサイトの初代培養 === | ||
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== 参考文献 == | == 参考文献 == | ||
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