「Na-K-2Cl共輸送体」の版間の差分

英：Na-K-2Cl cotransporter<br>

{{box|text=　Na-K-2Cl共輸送体（Na-K-2Cl cotransporter; NKCC）は、細胞膜上に局在し、Na⁺、K⁺と2個のCl^-を同時に輸送するイオントランスポーターである。高等動物ではNKCC1 (SLC12A1)とNKCC2 (SLC12A2)の2つのサブファミリーが存在し、NKCC1はユビキタスに、NKCC2は主に腎臓の尿細管に発現する。主な働きとして、細胞内外へのイオン輸送の制御と、それによる生体・細胞内の容量制御に関与する。その他、神経細胞においては、NKCC1が細胞内Cl^-濃度の調節に関与し、細胞内Cl^-濃度はGABAやグリシン受容体など陰イオンチャネルを介する膜電位変化（脱分極・過分極）に影響を及ぼすため、神経機能、特に生体における脳機能・精神機能に重要な役割を果たすことが示唆されている。ヒトNKCC2は低カリウム血症などを起こすBartter症候群の原因遺伝子であることが報告されている。}}

　16世紀から[[浮腫]]に対する[[利尿薬]]の治療効果が知られていた。20世紀に入り合成化学が進歩すると、1950年代に[[サイアザイド系利尿薬]]が、1960年代に[[ループ利尿薬]]が開発された<ref name=野田裕美2011><pubmed></pubmed></ref> 。ループ利尿薬の標的の分子実態を探す目的で、犬の腎臓の膜タンパク質抽出液を用いて放射線同位元素で標識したループ利尿薬と結合する分子を同定し、モノクローナル抗体を作成した<ref !!! INVALID CITATION !!! 2><pubmed></pubmed></ref> 。それらを用い、λファージのcDNAライブラリーを利用した発現クローニングでNKCC1<ref name=Xu1994><pubmed>8134373</pubmed></ref> とNKCC2<ref name=Payne1994><pubmed>7514306</pubmed></ref> がクローニングされ、その後各生物のNKCC1 (SLC12A1), SLC12A2及びNKCC2 (SLC12A2)の遺伝子が次々に同定された。

[[図1. NKCC1/2の構造<ref name=Garneau2020><pubmed>33052775</pubmed></ref>

 

Solute carrier protein (溶質輸送体タンパク質, Slc）12ファミリーに属する膜タンパク質は12回膜貫通型でN末、C末が細胞内に局在する構造を取る。NKCC1は約1200アミノ酸(サメ型は1191残基)を含み、ウェスタンブロッティングでは見かけ上195kDaほどの大きさとなる。膜貫通領域(transmembrane, TM)7-8の細胞外領域でグリコシル化（糖鎖修飾）を受けており、グルコシダーゼによる脱グリコシル化で、分子量から期待されるサイズである~130kDaでの検出となる<ref name=Xu1994><pubmed>8134373</pubmed></ref> 。

 

　ヒトのNKCC1遺伝子は5番目の染色体上にあり、27のエクソンが連なり、mRNAが作製される。21番目のエクソン（16アミノ酸をコード）がスキップしたスプライスバリアントが存在し、NKCC1B と呼ばれる。NKCC2は15番目の染色体上にあり、約1100アミノ酸(ヒト型は1099残基)を含み、NKCC1同様グリコシル化を受けている<ref name=Payne1994><pubmed>7514306</pubmed></ref> 。NKCC2のORFは26のエクソンにまたがっているが、NKCC2のクローニングの際、4番目のエクソンが異なる3つのスプライスバリアント(NKCC2A, B, F)が見いだされている<ref name=Igarashi1995><pubmed>7573490</pubmed></ref> 。

NKCCが含まれるSlc12にはNKCC1/2の他に、Na⁺、Cl^-の共輸送体であるNCCとK⁺、Cl^-の共輸送体であるKCC1-4が含まれる。機能未知のCCC8及びCCC9を構造上ファミリーに加える考えもあるが、相同性はNKCC、NCC、KCCと比べて低い<ref name=Reid2020><pubmed>32286222</pubmed></ref> 。

 

[[図2. 腎臓におけるNKCC2スプライスバリアントの発現分布

マウスの胎仔の腎臓組織を用いて行ったin situ hybridizationの結果をカラー表示したもの<ref name=Gimenez2002><pubmed>11815599</pubmed></ref> 。]]

 

　NKCC2は腎臓特異的に発現しているが、腸管や膵臓ランゲルハンス島のβ細胞に発現するという報告もある<ref name=Alshahrani2012><pubmed>22759959</pubmed></ref><ref name=Xue2009><pubmed>19460103</pubmed></ref> 。腎臓ではヘンレ係蹄の太い上行脚から遠位尿細管に発現しており、その中でのバリアントの発現分布は、NKCC2Fは腎髄質内の尿細管、NKCC2Aは腎皮質尿細管と遠位尿細管、NKCC2Bはマクラデンサに発現している<ref name=Gimenez2002><pubmed>11815599</pubmed></ref> 。  

Slc12に属する分子は、Na⁺-K⁺-ATPaseによって生じるNa⁺、K⁺の濃度勾配を利用してCl^-の移動を行うシンポーターであり、その中でNKCCは1つのNa⁺、1つのK⁺、2つのCl^-を同時に同方向に輸送する。NKCC1を介するCl^-の取り込みとそれに伴う水分の流入は細胞の高張ストレスに対する細胞容積調節の主因子となっている。腎尿細管(NKCC2優位)や唾液腺分泌上皮など極性のある細胞では一面に局在することにより、Na⁺やCl^-等のイオンを一方向行に移行し、Na⁺の再吸収や分泌液の生成に作用する<ref name=Khalafalla2020><pubmed>32231563</pubmed></ref><ref name=MacAulay2020><pubmed>32870507</pubmed></ref> 。  

[['''図3. 腎尿細管におけるNKCC2の局在'''）<br>

腎尿細管ではNKCC2は尿管側に局在し、尿管内の Na⁺、K⁺、2Cl^- を細胞内に流入させる。K⁺はROMKを介して再び尿管側へ、Na⁺とCl^-はそれぞれCl^-チャネル(ClC-Kb)とNa⁺/K⁺-ATPaseを介して血管内に輸送される。<br>

文献<ref name=Devuyst2015><pubmed>26579681</pubmed></ref>を改変]]

 

　神経細胞においては、神経特異的KCC2と協働し細胞内Cl^-濃度の調節に関与する。上述のようにNKCC1の発現レベルの変化については統一されていないが、KCC2は発達と共に発現レベルが上昇することが知られている<ref name=Rivera1999><pubmed>9930699</pubmed></ref> 。このため、KCCはCl^-を細胞外にくみ出す活性を持つが、神経細胞では発達につれてKCC2の発現レベルが上昇し、KCC活性がCl^-を流入させるNKCC活性を上回り、細胞内Cl^-濃度は低下する。神経細胞に発現するGABA_A受容体やグリシン受容体は陰イオンチャネルであり、活性化すると生理的条件下ではCl^-やHCO₃^-など陰イオンを透過する。細胞内外の陰イオンではCl^-が最も多く、Cl^-はHCO₃^-より透過性が高いため(GABA_A受容体ではP<small>HCO₃^-</small>/P<small>Cl^-</small>=~0.2<ref name=Kaila1994><pubmed>7522334</pubmed></ref> )、Cl^-が優位に透過することになるが、その場合、膜電位変化はCl^-の平衡電位に近づくように変化する。平衡電位はおおむね細胞内外の当該イオンの濃度からネルンストの式から計算される。

E: 平衡電位、　R: 気体定数、　T: 温度(K)、　F: ファラデー定数、　z: イオンの価数、　[ion]_out: 細胞外イオン濃度、　[ion]_in: 細胞内イオン濃度

　電気生理学的に平衡電位を測定することによりネルンストの式を用い、該当イオンの細胞内濃度を計算することができる。例として、NKCC1が検出できる生後1-3日のラット脳の皮質板（cortical plate）の[Cl^-]inは約30 mMであるが、NKCC1が検出感度以下になる生後11-20日の大脳皮質II/III層の神経細胞の[Cl^-]inは約9 mMであった<ref name=Yamada2004><pubmed>15090604</pubmed></ref> 。

　このようにKCC2が十分発現している細胞では[Cl^-]inが減少することで、GABA_A受容体やグリシン受容体が活性化されると、細胞内イオンは細胞内へ流入し、過分極を引き起こすため、これらのリガンドは抑制性伝達物質として作用する。

　NKCC1が優位な未熟な神経細胞ではGABA_A受容体の活性化により細胞内のCl^-が流出し脱分極を起こす。成長につれてKCC2の発現が上昇し[Cl^-]inが低下するとGABA_A受容体の活性化は細胞内へのCl^-の流入を起こし過分極する<ref name=Andrews2020><pubmed>33266310</pubmed></ref> 。

　NKCC2が関わる遺伝病として、常染色体潜性（劣性）遺伝をとる1型Bartter症候群がある<ref name=Simon1996><pubmed>8640224</pubmed></ref><ref name=日本小児腎臓病学会2014><pubmed></pubmed></ref><ref name=松野下夏樹2015><pubmed></pubmed></ref> 。Bartter症候群は、低カリウム血症や代謝性アルカローシスなどをきたす先天性の尿細管機能障害に基づく疾患であり、他の原因遺伝子を含む型と合わせてBartter症候群をなす。Bartter症候群全体での有病率は1/100万人といわれる。1型Bartter症候群は新生児Bartter症候群とも呼ばれ、先進国では出生前から羊水過多などで発見される。他の型と比べ重篤になる傾向がある。