「ディファレンシャルディスプレイ」の版間の差分

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== 原理と適用例  ==
== 原理と適用例  ==
 遺伝子から転写されたmRNAの量は、遺伝子機能の量的な面を反映していると考えられるため、遺伝子の発現量から機能を推測しようというのが、この遺伝子発現解析の基本的な概念である。本技法は、1992年にLiangとPardeeにより、mRNAレベルで[[wikipedia:ja:真核生物|真核細胞]]の試料間で、遺伝子発現の同定比較を行うことできる技術として発表された<ref name="Liang_Pardee_Science" /><ref name="Liang_Biotech" />。形態的、遺伝学的、または実験的処置等に異なる試料間で、どの遺伝子発現に変化・差異があるかを見出すことができる。  
 遺伝子から転写されたmRNAの量は、遺伝子機能の量的な面を反映していると考えられるため、遺伝子の発現量から機能を推測しようというのが、この遺伝子発現解析の基本的な概念である。本技法は、1992年にLiangとPardeeにより、mRNAレベルで[[wikipedia:ja:真核生物|真核細胞]]の試料間で、遺伝子発現の同定比較を行うことできる技術として発表された<ref name="Liang_Pardee_Science" /><ref name="Liang_Biotech" />。形態的、遺伝学的、または実験的処置等に異なる試料間で、どの遺伝子発現に変化・差異があるかを見出すことができる。  


 例えば、物質Aの添加により遺伝子Bの発現の増加/減少が見出された場合、この遺伝子Bの発現が物質Aにより誘導/抑制されていると考えられる。防御蛋白質や阻害作用の解析などに多くの適用が考えられる。脳神経科学領域では、ある[[学習]]課題が成立した動物個体としていない動物個体の細胞間で、発現に差のある遺伝子を同定することで、その学習に関与する遺伝子群が同定された適応例がある(図1)<ref><pubmed>10531455</pubmed></ref><ref><pubmed>11168596</pubmed></ref>。[[Image:DD-fig1rev.jpg|thumb|center|300px|図1 Differential Displayの結果。 条件付けを行った軟体動物(ナメクジ)個体(P, Paired)及び対照群の個体(U, Unpaired)、各群2サンプルから調整したtotal RNAを用いてDDを行った。 用いたOligodTMN primer (N = C)及びArbitrary primerは上部に示す。本実験はGeneHunter社の製品を用いて行った。群間で差があり、且つ2サンプルで再現性のあるバンドを探索した。多くのバンドが再現性良く現れており、群間で差は認められない。*で示すバンドは同一群内で異なる結果を示していることから、本実験では再現性が無い、と判断できた。矢印で示す1及び2がPaired群で増加、3及び4が減少しているバンドを示す。右パネルはDNAマーカーを示す。]]比較的感度が良く、実験操作も簡便に行うことができ、また必要に応じて、3試料以上の間での比較に拡張することも可能である。
 例えば、物質Aの添加により遺伝子Bの発現の増加/減少が見出された場合、この遺伝子Bの発現が物質Aにより誘導/抑制されていると考えられる。防御蛋白質や阻害作用の解析などに多くの適用が考えられる。脳神経科学領域では、ある[[学習]]課題が成立した動物個体としていない動物個体の細胞間で、発現に差のある遺伝子を同定することで、その学習に関与する遺伝子群が同定された適応例がある(図1)<ref><pubmed>10531455</pubmed></ref><ref><pubmed>11168596</pubmed></ref>。比較的感度が良く、実験操作も簡便に行うことができ、また必要に応じて、3試料以上の間での比較に拡張することも可能である。


 原法では、検出方法として[[wikipedia:ja:放射性同位元素|放射性同位元素]](radioisotope, RI)を用いていた(RI-DD法)が<ref name="Liang_Pardee_Science" />、その後、蛍光標識された[[wikipedia:ja:プライマー (生物)|プライマー]]を用いて検出する「[[wikipedia:ja:蛍光|蛍光]]ディファレンシャルディスプレイ (FDD) 法」が開発され、検出感度、操作性や再現性が高められた<ref name="Liang_Biotech" /><ref>'''伊藤隆司'''&amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;lt;br&amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;gt;Differential Display&amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;lt;br&amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;gt;実験医学別冊 新遺伝子工学ハンドブック改訂第4版(村松正實、 山本雅編)羊土社: 2003, pp. 60-64 (なお、第5版から本項目は削除されている)</ref>。  
 原法では、検出方法として[[wikipedia:ja:放射性同位元素|放射性同位元素]](radioisotope, RI)を用いていた(RI-DD法)が<ref name="Liang_Pardee_Science" />、その後、蛍光標識された[[wikipedia:ja:プライマー (生物)|プライマー]]を用いて検出する「[[wikipedia:ja:蛍光|蛍光]]ディファレンシャルディスプレイ (FDD) 法」が開発され、検出感度、操作性や再現性が高められた<ref name="Liang_Biotech" /><ref>'''伊藤隆司'''<br>Differential Display<br>実験医学別冊 新遺伝子工学ハンドブック改訂第4版(村松正實、 山本雅編)羊土社: 2003, pp. 60-64 (なお、第5版から本項目は削除されている)</ref>。


== 利点と不利点  ==
== 利点と不利点  ==

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