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→アデノ随伴ウイルスベクター粒子の作製法
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==== アデノ随伴ウイルスベクター粒子の作製法 ==== | ==== アデノ随伴ウイルスベクター粒子の作製法 ==== | ||
[[Image:ウィルスベクター図2|thumb|right|450px|'''図1. AAVベクター粒子の産生''' <br />]] | |||
ITR間の[[Rep]]、[[Cap]]の2つの遺伝子を取り除き、そのスペースにプロモーターと目的の遺伝子を挿入したベクタープラスミドを作製する（図２）。Rep、Cap（ウイルス複製やカプシド形成に必要なタンパク質）は別のプラスミドで供給する。またアデノウイルスのヘルパー作用としてE1A、E1B、E2A、VA、E4遺伝子が必要となるが、このうちE1AとE1BはHEK293細胞（E1AとE1Bでトランスフォームしている）から、残りのE2A、E4、VAはヘルパープラスミドとして供給する。これら3つのプラスミドでHEK293細胞をトランスフェクションすると、Rep、Cap遺伝子はもたずITR間の外来遺伝子のみをもつウイルス粒子が産生される。粒子は核内に存在するため細胞を凍結融解し、塩化セシウムを用いた密度勾配超遠心法を用いて精製する。 | |||
==参考文献== | ==参考文献== | ||
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