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細 (→IP3シグナルの検出) |
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表2 組換えIP<sub>3</sub>センサー蛍光タンパク質 | 表2 組換えIP<sub>3</sub>センサー蛍光タンパク質 | ||
{| class="wikitable" | |||
GFP-PHD PLC- | |+表2. 組換えIP<sub>3</sub>センサー蛍光タンパク質 | ||
PH domain Kd=93 nM GFP <ref name=Hirose1999><pubmed>10348740</pubmed></ref> | ! IP3センサー名 !! IP3結合領域 !! IP3結合の親和性/阻害※1 !! 蛍光検出※2 !! 文献 | ||
|- | |||
LIBRA Rat IP<sub>3</sub>R1/2/3 | | GFP-PHD || PLC-δ PH domain || Kd=93 nM || GFP || <ref name=Hirose1999><pubmed>10348740</pubmed></ref> | ||
IP<sub>3</sub>BD Kd=117.2~491.5 nM FRET | |- | ||
CFP/YFP | | LIBRA || Rat<br>IP<sub>3</sub>R1/2/3 IP<sub>3</sub>BD || Kd=117.2~491.5 nM || FRET<br>CFP/YFP<br>CFP/Venus || <ref name=Tanimura2004><pubmed>15272011</pubmed></ref> , <ref name=Tanimura2009><pubmed>19158094</pubmed></ref> | ||
CFP/Venus <ref name=Tanimura2004><pubmed>15272011</pubmed></ref> , <ref name=Tanimura2009><pubmed>19158094</pubmed></ref> | |- | ||
| Fretino || Human<br>IP<sub>3</sub>R1 IP<sub>3</sub>BCD || Kd=7.6~190 nM || FRET<br>CFP/YFP || <ref name=Sato2005><pubmed>16053285</pubmed></ref> | |||
Fretino Human IP<sub>3</sub>R1 | |- | ||
IP<sub>3</sub>BCD Kd=7.6~190 nM FRET | | FIRE || Rat<br>IP<sub>3</sub>R1/2/3 IP<sub>3</sub>BD || Kd=31.3~36.4 nM || FRET<br>CFP/YFP || <ref name=Remus2006><pubmed>16249182</pubmed></ref> | ||
CFP/YFP <ref name=Sato2005><pubmed>16053285</pubmed></ref> | |- | ||
| InsP<sub>3</sub> sensor (InsP<sub>3</sub>R-LBD) || Human<br>IP<sub>3</sub>R1 IP3BCD || Kd=3.0~10.1 nM || FRET<br>Cerulean/Venus<br>BRET<br>Sluc/Venus || <ref name=Gulyás2015><pubmed>25932648</pubmed></ref> | |||
FIRE Rat IP<sub>3</sub>R1/2/3 | |- | ||
IP<sub>3</sub>BD Kd=31.3~36.4 nM FRET | | IRIS || Mouse<br>IP<sub>3</sub>R1 IP<sub>3</sub>BCD || Kd=47~550 nM || FRET<br>Venus/YFP || <ref name=Matsu-ura2006><pubmed>16754959</pubmed></ref> , <ref name=Matsu-Ura2019><pubmed>30886280</pubmed></ref> | ||
CFP/YFP <ref name=Remus2006><pubmed>16249182</pubmed></ref> | |- | ||
| CFLA-IP3 || Rat<br>IP<sub>3</sub>R2 IP<sub>3</sub>BD※2 || IC<sub>50</sub>=139.7/352.1 nM for 30/100 nM FLL || FRET Cerulean/FLL || <ref name=Oura2016><pubmed>27251449</pubmed></ref> | |||
|} | |||
IP<sub>3</sub> | ※1複数のセンサータイプがもつIP<sub>3</sub>結合親和性(Kd)/あるいは競合結合阻害濃度(IC50)の範囲<br> | ||
Cerulean/Venus | ※2 IP<sub>3</sub>を蛍光検出するための方法、および使用する蛍光タンパク質/蛍光化合物<br> | ||
BRET | :PH:Pleckstrin homology (PH)ドメイン、IP<sub>3</sub>BD:IP<sub>3</sub>リガンド結合ドメイン(IP<sub>3</sub> ligand binding domain)<ref name=Yoshikawa1996><pubmed>8663526</pubmed></ref> 、IP<sub>3</sub>BCD:IP<sub>3</sub>リガンド結合コアドメイン(IP<sub>3</sub> ligand binding core domain)<ref name=Yoshikawa1996><pubmed>8663526</pubmed></ref> 、CFLA:competitive fluorescent ligand assay、FLL:蛍光低親和性リガンド(fluorescent low-affinity ligand)、Sluc:Renilla Super luciferase、FRET:fluorescence resonance energy transfer、BRET:bioluminescence resonance energy transfer | ||
Sluc/Venus <ref name=Gulyás2015><pubmed>25932648</pubmed></ref> | |||
IRIS Mouse IP<sub>3</sub>R1 | |||
IP<sub>3</sub>BCD Kd=47~550 nM FRET | |||
Venus/YFP <ref name=Matsu-ura2006><pubmed>16754959</pubmed></ref> , <ref name=Matsu-Ura2019><pubmed>30886280</pubmed></ref> | |||
CFLA-IP<sub>3</sub> | |||
Cerulean/FLL <ref name=Oura2016><pubmed>27251449</pubmed></ref> | |||
※1複数のセンサータイプがもつIP<sub>3</sub>結合親和性(Kd)/あるいは競合結合阻害濃度(IC50)の範囲 | |||
※2 IP<sub>3</sub>を蛍光検出するための方法、および使用する蛍光タンパク質/蛍光化合物 | |||
PH:Pleckstrin homology (PH)ドメイン、IP<sub>3</sub>BD:IP<sub>3</sub>リガンド結合ドメイン(IP<sub>3</sub> ligand binding domain)<ref name=Yoshikawa1996><pubmed>8663526</pubmed></ref> 、IP<sub>3</sub>BCD:IP<sub>3</sub>リガンド結合コアドメイン(IP<sub>3</sub> ligand binding core domain)<ref name=Yoshikawa1996><pubmed>8663526</pubmed></ref> 、CFLA:competitive fluorescent ligand assay、FLL:蛍光低親和性リガンド(fluorescent low-affinity ligand)、Sluc:Renilla Super luciferase、FRET:fluorescence resonance energy transfer、BRET:bioluminescence resonance energy transfer | |||
IP<sub>3</sub>センサーを用いたIP<sub>3</sub>の検出により、刺激によって増加する細胞内IP<sub>3</sub>濃度がCa<sup>2+</sup>振動スパイクが発生する間は持続し、Ca<sup>2+</sup>の初期放出後にIP<sub>3</sub>濃度がピークになり、産生と代謝のバランスによりわずかにIP<sub>3</sub>も振動することなどが示されている<ref name=Matsu-Ura2019><pubmed>30886280</pubmed></ref> 。 | IP<sub>3</sub>センサーを用いたIP<sub>3</sub>の検出により、刺激によって増加する細胞内IP<sub>3</sub>濃度がCa<sup>2+</sup>振動スパイクが発生する間は持続し、Ca<sup>2+</sup>の初期放出後にIP<sub>3</sub>濃度がピークになり、産生と代謝のバランスによりわずかにIP<sub>3</sub>も振動することなどが示されている<ref name=Matsu-Ura2019><pubmed>30886280</pubmed></ref> 。 |