16,039
回編集
「Förster共鳴エネルギー移動」の版間の差分
ナビゲーションに移動
検索に移動
細
→FRETの効率を決定する因子
細編集の要約なし |
細 (→FRETの効率を決定する因子) |
||
| 34行目: | 34行目: | ||
ここでf<sub>D</sub>(λ)はピーク値を１としたドナー発光スペクトル、 ε<sub>A</sub>(λ)はアクセプターの[[モル吸光係数]]、λは波長である。 | ここでf<sub>D</sub>(λ)はピーク値を１としたドナー発光スペクトル、 ε<sub>A</sub>(λ)はアクセプターの[[wj:モル吸光係数|モル吸光係数]]、λは波長である。 | ||
''J''を用い特定のドナーとアクセプターの間にFörster距離''R<sub>0</sub>''が以下のように定義される。これはエネルギー移動効率が50%となるドナーとアクセプターの距離である。通常の蛍光分子の場合、5 nm程度である。 | ''J''を用い特定のドナーとアクセプターの間にFörster距離''R<sub>0</sub>''が以下のように定義される。これはエネルギー移動効率が50%となるドナーとアクセプターの距離である。通常の蛍光分子の場合、5 nm程度である。 | ||
| 42行目: | 42行目: | ||
''κ''はドナーとアクセプターの相互分子配向である。多くの場合、正確に求める事は困難であるため、しばしば''κ''<sup>2</sup> =2/3 | ''κ''はドナーとアクセプターの相互分子配向である。多くの場合、正確に求める事は困難であるため、しばしば''κ''<sup>2</sup> =2/3 と仮定される。この値は、両方の色素が自由に回転しており、励起状態の間は等方的に配向していると考えられる場合に得られる。色素が固定されている場合や自由に回転することができないような場合、''κ''<sup>2</sup> =2/3 とは仮定できない。''Q<sub>0</sub>''はアクセプターが無い場合のドナーの蛍光[[wj:量子収率|量子収率]]、''n''は媒体の[[wj:屈折率|屈折率]]（水、25 °Cの場合、1.3342）、''N<sub>A</sub>''は[[wj:アボガドロ数|アボガドロ数]]である。これらの定数を当てはめると、''κ''より前の部分は、8.786 x 10<sup>11</sup> mol L<sup>-1</sup> cm nm<sup>2</sup>となる<ref><pubmed> 10964438</pubmed>但しこの論文にはミスプリが有り、p. 439で''κ''<sup>2</sup> とすべき所を、''κ''としている。</ref>。 | ||
''R<sub>0</sub>''を用いると、FRET効率''E''は次のように表す事が出来る。 | ''R<sub>0</sub>''を用いると、FRET効率''E''は次のように表す事が出来る。 | ||
| 50行目: | 50行目: | ||
Förster距離''R<sub>0</sub>''が大きいドナーとアクセプターの組み合わせの方が、FRET効率''E''が良い。''R<sub>0</sub>'' | Förster距離''R<sub>0</sub>''が大きいドナーとアクセプターの組み合わせの方が、FRET効率''E''が良い。''R<sub>0</sub>''を大きくするためには蛍光量子収率''Q<sub>0</sub>''がよいドナー、モル吸光係数''ε<sub>A</sub>(λ)''が良いアクセプター、またいずれも長波長域にあるドナーとアクセプターの組み合わせを選択する。 | ||
ドナーとアクセプターの蛍光スペクトルが変化しない状態では、ドナーとアクセプター間の距離''r''と配向''κ''の変化をFRETの効率の変化として読み取る事が出来る。これを利用して、様々な細胞現象に対するプローブをデザインする事が可能である。 | ドナーとアクセプターの蛍光スペクトルが変化しない状態では、ドナーとアクセプター間の距離''r''と配向''κ''の変化をFRETの効率の変化として読み取る事が出来る。これを利用して、様々な細胞現象に対するプローブをデザインする事が可能である。 | ||